Worlder.com сайтына кіргеніңіз үшін рахмет. Сіз қолданатын шолғыш нұсқасы шектеулі CSS қолдауы бар. Жақсы нәтижеге қол жеткізу үшін жаңа шолғышты пайдалануды ұсынамыз (немесе Internet Explorer-де үйлесімділік режимін ажырату). Осы уақытта, қолдауды қамтамасыз ету үшін біз сайтты стильдер мен JavaScript-тен көрсетеміз.
Модикалық өзгерістің жануарлар модельдерін құру (МК) МК зерттеу үшін маңызды негіз болып табылады. Елу төрт Зеландия ақ қояндар Шам-операциялар тобына, бұлшықет имплантациясы тобына (Me Group) және ядро Pulpos Implantation Group (NPE Group) болып бөлінді. NPE тобында омыртқааралық дискілерде қолмен хирургиялық тәсілдер пайда болды және инемен Аяқталған омыртқалы денені соңғы тақтайшаның жанында тесу үшін пайдаланылды. NP L1 / 2 омыртқалы дискілерінен шприцке шығарылып, оған енгізілген. Субхондральды сүйектің тесіктерін бұрғылау. Бұлшықет имплантациясы тобындағы хирургиялық процедуралар мен бұрғылау әдістері және Sham-Property Group компаниясы NP имплантация тобындағы көрсеткіштермен бірдей болды. Мен топта тесікке біршама бұлшықет тесік салынды, ал Шам-операция тобында тесікке ештеңе қойылған жоқ. Жұмыстан кейін сканерлеу және молекулалық биологиялық тестілеу жүргізілді. NPE тобындағы сигнал өзгерді, бірақ «Шам-операция» тобында және мен тобында айқын сигнал өзгерген жоқ. Гистологиялық байқау Имплантация орнында тіндердің көбеюі байқалғанын және NPE тобында IL-4, IL-17 және IFN-γ өрнек ұлғайтылғанын көрсетті. NP-ді субтондральды сүйекке имплантациялау MC жануарларының моделін қалыптастыра алады.
Модельдік өзгерістер (MC) - омыртқалы мәйнектілер мен омыртқалы мәйнектілер мен ішкі сүйек кемігі, магниттік резонанстық бейнелерде көрінетін (MRI). Олар байланысты симптомдары бар жеке тұлғаларда жиі кездеседі1. Көптеген зерттеулер MC-дің төмен арқалық ауырсынуымен (LBP) арқасында 2,3 есебінен маңызды болды. De Roos et.4 және модель және Al.5 Алғашқы алғаш рет омыртқалы сүйек кемігінде субхональды сигналдың үш түрлі түрлерін сипаттады. Модик типі Мен өзгерістерім T1 өлшенген (T1WW) тізбегі және T2 өлшенген (T2W) тізбегіндегі гиперденгендер. Бұл зақымдануды сүйек кемігіндегі сынғыштар мен іргелес қан тамырлары түйіршіктеу тіндерін ашады. II модель түріндегі өзгертулер T1WW және T2W тізбегінде жоғары сигналды көрсетеді. Зақымданудың бұл түрінде жоюды табуға болады, сонымен қатар көрші сүйек кемігін гистологиялық майдан ауыстыруға болады. III модель түріндегі өзгертулер Т1В-де және T2W тізбегінде төмен сигналды көрсетеді. Склеротикалық зақымданулар мәзілдіктерге сәйкес байқалды6. МК омыртқаның патологиялық ауруы болып саналады және омыртқаның көптеген дегенеративті ауруларымен тығыз байланысты7,8,9.
Қол жетімді мәліметтерді ескере отырып, бірнеше зерттеулер этиологиясы және МК патологиялық механизмдері туралы егжей-тегжейлі түсінік берді. Альберт және басқалар. MC дискіні грыжизациялаудан туындағанын ұсынды. Ху және басқалар. Mc-ті қатты дискінің бұзылуына жатқыздым10. KROC «Ішкі диск үзіндісі» тұжырымдамасын ұсынды, ол қайталанатын дискілік жарақат қоспаның ішінде микрокредиттерге әкелуі мүмкін. Клефт қалыптастырудан кейін, пульсия (NP) ядросының жойылуын толықтыруы мүмкін, бұл Автоиммундық реакцияны тудыруы мүмкін, бұл одан әрі МК11 дамуына әкеледі. Ma et al. Осыған ұқсас көзқараспен бөлісіңіз және NP-индуктивті AutoImmunity MC12 патогенезінде басты рөл атқаратындығы туралы хабарлады.
Иммундық жүйе жасушалары, әсіресе CD4 + T Helper лимфоциттері, аутоиммунитеттің патогенезінде маңызды рөл атқарады13. Жақында ашылған TH17 Ішкі ішкі жиын IL-17 қабатының қабыну цитокинін шығарады, Химокиннің өрнегін басқарады және ifn-γ14 шығару үшін зақымдалған органдардағы T жасушаларын ынталандырады. 12 жасушалар иммундық жауаптардың патогенезінде ерекше рөл атқарады. IL-4 өкілі «Өкілді» жасушасы ретінде өрнек қатты иммунопатологиялық зардаптарға әкелуі мүмкін15.
Көптеген клиникалық зерттеулер MC16,17,19,19,21,21,22,22,22,22,22,224 бойынша өткізілгенімен, әлі де жануарларда жиі кездесетін және болуы мүмкін MC процесін еліктеуге болатын жануарлардың тәжірибелік модельдерінің жетіспеушілігі әлі де бар мақсатты терапия сияқты этиологияны немесе жаңа емдеуді зерттеу үшін қолданылады. Бүгінгі таңда патологиялық механизмдерді зерттейтін бірнеше жануарлардың бірнеше жануарлар модельдері ғана хабарланды.
Альберт және Ма ұсынған аутоиммунды теориясы негізінде, бұл зерттеуде осы омыртқалы омыртқалық тақтайшаның жанында қарапайым және репродуктивті қоянның MC моделі құрылды. Басқа міндеттер - жануарлардың модельдерінің гистологиялық сипаттамаларын сақтау және МК дамуындағы ҰЭТ-ның нақты тетіктерін бағалау. Осы мақсатта біз Молекулалық биология, МРТ және гистологиялық зерттеулер сияқты әдістерді қолданамыз, бұл МК-нің дамуын зерттеу.
Хирургия кезінде екі қоян қайтыс болды, ал МРИ кезінде анестезия кезінде төрт қоян қайтыс болды. Қалған 48 қоян аман қалды және операциядан кейін ешқандай мінез-құлық немесе неврологиялық белгілер көрсетті.
MRI көрсеткендей, әр түрлі тесіктердегі ендірілген тіндердің сигнал қарқындылығы басқаша екенін көрсетеді. NPE тобындағы L5 омыртқормының сигнал қарқындылығы біртіндеп 12, 16 және 20 аптада өзгерді (T1W реті төмен сигналды көрсетті, ал T2W тізбегі) MRI көрінісі бар, ал MRI көрінісі Енгізілген бөлшектердің қалған екі тобының сол кезең ішінде салыстырмалы түрде тұрақты болып қалды (1А, б сурет).
(A) 3 рет қоян белгісіндегі өкпе белгісінің өкілдігі. Шам-операциялар тобының суреттерінде ешқандай сигналдық ауытқулар табылған жоқ. (B) мен топтағы омыртқалы дененің сигналдық сипаттамалары Шам-операциялар тобындағы адамдарға ұқсас, ал уақыт өте келе ендіру сайтында айтарлықтай сигналдың өзгеруі байқалмайды. (C) NPE тобында төмен сигнал Т1В тізбегінде айқын көрінеді, ал аралас сигнал және төменгі сигнал T2W тізбегінде айқын көрінеді. 12 аптаның ішінде 20 апталық кезеңге дейін, T2W реттегідегі төмен сигналдарды қоршап тұрған спорадикалық жоғары сигналдар азаяды.
NPE Group-та айқын сүйек гиперплазиясының имплантация сайтында көруге болады, ал сүйек гиперплазиясы NPE тобымен салыстырғанда 12-ден 20 аптаға дейін (2с-сурет) тезірек пайда болады, бұл модельделген омыртқалықта айтарлықтай өзгеріс байқалмайды денелер; Шам тобы және мен тобы (Cурет 2С) 2А, b).
(A) Имплантацияланған бөліктегі омыртқалы дененің беті өте тегіс, тесік жақсы емделеді және омыртқалы денеде гиперплазия жоқ. (B) Мені топтағы имплантацияланған сайттың пішіні Шам операциялар тобындағы ұқсас және уақыт өте келе имплантацияланған сайттың көрінісі айқын өзгеріс жоқ. (C) NPE тобындағы имплантацияланған сайтта сүйек гиперплазиясы пайда болды. Сүйек гиперплазиясы тез арылтылып, омыртқалы омыртқалы денеге дейін кеңейіп, омыртқа қолданылады.
Гистологиялық талдау сүйек қалыптастыру туралы толығырақ ақпарат береді. 3-сурет H & E-мен боялған операциядан кейінгі бөлімдердің фотосуреттері көрсетілген. Шам-операциялар тобында хондроциттер жақсы ұйымдастырылды және жасуша таралуы анықталмады (Cурет 3а). Мен тобындағы жағдай Шам-операциялар тобында ұқсас болды (Cурет 3b). Алайда, NPE тобында имплантация орнында көптеген хондроциттер мен NP тәрізді жасушалардың таралуы байқалды (Cурет 3С);
(A) Trabeculae-ді ұсақталған тақтайшаның жанында көруге болады, хондроциттер біркелкі жасуша мөлшері мен пішінімен және пішінді және таратпайды (40 рет). (B) мендегі топтағы имплантация орнының жағдайы Шам тобының осыған ұқсас. Трабекула мен хондроциттерді көруге болады, бірақ имплантация орнында айқын таратпау (40 рет). (B) хондроциттер мен NP тәрізді жасушалар едәуір, ал хондроциттердің пішіні мен мөлшері біркелкі емес екенін көруге болады (40 рет).
Interleukin 4 (IL-4) MRNA, Interleukin 17 (IL-17) MRNA, және Interferon γ (ifn-γ) MRNA (IFN-γ) MRNA-да NPE және ME топтарында да байқалды. Мақсатты гендердің өрнектері салыстырылған кезде, IL-4, IL-17, IL-17 және IFN-γ гендік өрнектері NPE-γ менімен салыстырғанда едәуір өсті, бұл мен тобымен және Шам операциялар тобымен салыстырғанда едәуір артты (Cурет 4) (P <0.05). Шам операциялар тобымен салыстырғанда IL-4, IL-17, IL-17 және IFN-γ өрнек деңгейлері менімен салыстырғанда аздап өсті және статистикалық өзгеріске жете алмады (P> 0.05).
NPE тобындағы IL-4, IL-17 және IFN-γ MRNA-ның (IL-17) бейнесі Шам операциялар тобындағы және Me Group-тен (P <0.05) қарағанда едәуір жоғары тенденция көрсетті.
Керісінше, мен тобындағы өрнек деңгейлері айтарлықтай айырмашылықты көрсетті (P> 0.05).
Батыс блотасын талдау IL-4 және IL-17-ге қарсы антиденелер арқылы жүргізілді, ал IL-17-ге қарсы антиденелер, өзгертулердің өзгертілген мРНҚ-ны растау үшін жүргізілді. ME Group және Sham операциялар тобымен салыстырғанда 5a, b суреттерінде көрсетілгендей, NPE тобындағы ИЛ-4 және IL-17 ақуыз деңгейі едәуір артты (P <0,05). Шам операциялар тобымен салыстырғанда, мен тобындағы IL-4 және IL-17 ақуыз деңгейі статистикалық маңызды өзгерістерге қол жеткізе алмады (P> 0.05).
(A) NPE тобындағы ИЛ-4 және ИЛ-17 ақуыз деңгейі менікі мен плацебо тобындағы (P <0.05) қарағанда едәуір жоғары болды. (B) Батыс блотының гистограммасы.
Операция кезінде алынған адам үлгілерінің саны шектеулі болғандықтан, МК патогенезі туралы нақты және егжей-тегжейлі зерттеулер біршама қиын. Біз өзінің патологиялық механизмдерін зерттеу үшін МК жануарлар үлгісін құруға тырыстық. Сонымен бірге, радиологиялық бағалау, гистологиялық бағалау және молекулалық биологиялық бағалау ҰЭТ-ның AUTORFART-тің туындаған МК курсын ұстану үшін пайдаланылды. Нәтижесінде, NP имплантациясының моделі 12 аптадан 20-аптаның ішінде сигнал қарқындылығының біртіндеп өзгеруіне әкелді (T1WW тізілімдері және T2W тізбегі және T2W тізбегі және төмен сигнал), тіндердің өзгеруі және гистологиялық және молекулярлық Биологиялық бағалау радиологиялық зерттеу нәтижелерін растады.
Осы эксперименттің нәтижелері көрнекі және гистологиялық өзгерістер NPE тобындағы омыртқалы дененің бұзылу учаскесінде болғандығын көрсетеді. Сонымен бірге, ИЛ-4, ИЛ-17 және IFN-γ гендердің, сонымен қатар IL-4, IL-17, IL-17 және IFN-γ көріністері байқалды, бұл омыртқа ядро тінінің бұзылуын білдіреді Дене сигналдық және морфологиялық өзгерістерге әкелуі мүмкін. Жануарлар моделінің омыртқалық сипаттамаларының сигналдық сипаттамалары (T1W тізбегі бойынша төмен сигнал, аралас сигнал, аралас сигнал және T2W реттікінде) адам омыртқормының төмен сигналдары және MRI сипаттамаларына да ұқсас Гистология мен өрескел анатомияның бақылауларын растаңыз, яғни омыртқалы дене жасушаларындағы өзгерістер прогрессивті болып табылады. Жедел жарақаттан туындаған қабыну реакциясы пункциядан кейін көп ұзамай пайда болуы мүмкін, бірақ MRI нәтижелері екі жыл ішінде сигналдың өзгергенін бірнеше рет өсіп келе жатқанын және 20 аптадан кейін пайда болғаннан кейін және MRI өзгерістерін қайтарып алу немесе қалпына келтіру белгілері жоқ болғанын көрсетті. Бұл нәтижелер Autodogous омыртқалы NP - қояндардағы прогрессивті мв құрудың сенімді әдісі.
Бұл пункция моделі жеткілікті дағдылар, уақыт және хирургиялық күш қажет. Алдын-ала тәжірибелерде, парафертациялық көп байқалған құрылымдарды бөлу немесе шамадан тыс ынталандыру, омыртқалы остеофиттердің пайда болуына әкелуі мүмкін. Көршілес дискілерді бүлдірмеу немесе тітіркендірмеу керек. Таза ену тереңдігі дәйекті және репродуктивті нәтижеге қол жеткізу үшін бақылау қажет болғандықтан, біз ұзындығы 3 мм қабыршақты кесу арқылы штепсельдік ұшты жасадық. Осы штепсельді пайдалану омыртқалы денеде біркелкі бұрғылау тереңдігін қамтамасыз етеді. Алдын ала тәжірибелерде, жұмысқа қатысқан үш ортопедиялық хирург 16 өлшеу инесін табылған, 18 өлшеу инелерімен немесе басқа әдістермен жұмыс істеу оңайырақ. Бұрғылау кезінде шамадан тыс қан кету үшін, инені біраз уақыт ұстап тұру біраз уақытқа созылатын тесік береді, бұл белгілі бір дәрежеде MC-нің белгілі бір дәрежеде басқаруға болатындығын білдіреді.
Көптеген зерттеулер Мақсатты Мақсатқа ие болғанымен, мк25,26,27-дің этиологиясы мен патогенезі туралы аз мәлімет бар. Біздің алдыңғы зерттеулерімізге сүйене отырып, біз AutoImmunity MC12 пайда болуы мен дамуында маңызды рөл атқаратынын білдік. Бұл зерттеу IL-4, IL-4, IL-17 және IFN-γ, антигенді ынталандырудан кейін CD4 + жасушаларының негізгі саралау жолдары болып табылатын IL-4, IFN-γ, ол. Біздің зерттеуімізде NPE тобы ИЛ-4, ИЛ-17, IFN-γ, ал IL-4 және IL-17-дің ақуыз деңгейі де жоғары болды.
Клиникалық тұрғыдан IL-17 MRNA өрнегі Disc Herniation28 науқастарынан NP ұяшықтарында ұлғайтылды. IL-4 және IFN-γ өрнек деңгейлері сау басқару элементтерімен салыстырғанда жедел компресативті диск гарниялық моделінде де анықталды. IL-17-ден аутоиммундық аурулардағы тіндердің зақымдануында негізгі рөл атқарады30 және IFN-γ31 иммундық реакциясын жақсартады. Жетілдірілген IL-17 делдалдық тіндердің зақымдануы MRL / LPR MISE32 және AutoImmunity-oSty33-де айтылды. IL-4 қабыну цитокиндерінің өрнегін тежеуі мүмкін (мысалы, IL-1β және TNFα) және макрофа активациясы34. IL-4-тің MRNA өрнегі NPE тобында IL-17-мен салыстырғанда әр түрлі болғандығы хабарланған, ал IFN-γ бір уақытта; NPE тобындағы IFN-γ MRNA өрнегі басқа топтарға қарағанда едәуір жоғары болды. Сондықтан, IFN-γ өндіріс ҰЭТ-ны аралық шағымданған қабыну реакциясының делдалы болуы мүмкін. Зерттеулер көрсеткендей, IFN-γ бірнеше ұяшық түрлерімен, соның ішінде іске қосылған 1 көмекші T ұяшықтары, табиғи киллерлік жасушалар және макрофагтар, және иммундық-қабыну цитокині, иммундық-қабыну цитокині.
Бұл зерттеу AutoImmune реакциясы МК пайда болған және дамуына қатыса алатындығын көрсетеді. Луома және басқалар. MC және NP сигналдық сипаттамалары MRI-ге ұқсас, екеуі де T2W реттік қосымшасында жоғары сигналды көрсетеді. Кейбір цитокиндер Ил-139 сияқты МК-нің пайда болуымен тығыз байланысты екендігі расталды. Ma et al. ҰЭТ-ның жоғары немесе төмен шығуы MC12 пайда болуына және дамуына үлкен әсер етуі мүмкін деп болжайды. Bobechko40 және герцебей және al.41 NP - бұл туылғаннан бастап тамырлы айналымға кіре алмайтын иммунотолерант тін. NP шығыстары шетелдік денелерді қанмен қамтамасыз етуге енгізеді, осылайша жергілікті аутоиммунды реакцияларға делінген. Аутоиммунды реакциялар көптеген иммундық факторларды тудыруы мүмкін, ал бұл факторлар тіндерге үнемі әсер етсе, олар сигнализацияның өзгеруіне әкелуі мүмкін. Бұл зерттеуде ИЛ-4, ИЛ-17 және IFN-γ шамадан тыс иммундық факторлар, сонымен қатар NP және MCS44 арасындағы тығыз байланысты дәлелдейді. Бұл жануарлардың моделі NP серпінді және соңғы тақтайшаға енуді жақсы елестетеді. Бұл процесс бұдан әрі AutoImmunity бағдарламасының MC-ге әсерін анықтады.
Күтілгендей, бұл жануарлардың моделі бізге MC зерттеу үшін мүмкін платформамен қамтамасыз етеді. Алайда, бұл модельде кейбір шектеулер бар: Біріншіден, жануарларды байқау кезеңінде, кейбір аралық сахналық қояндар гистологиялық және молекулалық биологияны тестілеу үшін эвтанизациялануы керек, сондықтан кейбір жануарлар уақыт өте келе «пайдаланылады». Екіншіден, бұл зерттеуде үш рет нүкте қойылған, бірақ біз, өкінішке орай, біз тек МК-ның бір түрін (модель түрін өзгертеді), сондықтан адамның ауруын дамыту процесін білдіру үшін жеткіліксіз, сондықтан уақытты көрсету керек Барлық сигналдың өзгеруіне қатысты жақсы. Үшіншіден, тіндік құрылымдағы өзгерістер гистологиялық бояулармен нақты көрсетілуі мүмкін, бірақ кейбір мамандандырылған әдістер осы модельдегі микроқұрылымдық өзгерістерді жақсы анықтай алады. Мысалы, полярланған жарық микроскопиясы қоян омыртқалы-алабындардағы фиброкартильдің пайда болуын талдау үшін пайдаланылды45. NP-дің MC ұзақ мерзімді эффектілері және борышқа қосымша зерттеуді қажет етеді.
Елу төрт жаңа Зеландия ақ қояндар (салмағы 2,5-3 кг, 3-3,5 ай, 3-3,5 ай), бұлшық еттер тобына, бұлшықет имплантациясы тобына (Me Group) және жүйке тамыры имплантация тобына (NPE Group) бөлінді. Барлық тәжірибелік процедураларды Тяньцзин ауруханасының этика комитеті мақұлдады, ал тәжірибелік әдістер бекітілген нұсқауларға сәйкес орындалды.
С.Собайма 46 хирургиялық техникасына кейбір жақсартулар жасалды. Әр қоян бүйірлік ұйқының орнына орналастырылды, ал беске созылған белдік омыртқа бес омыртқалығы (IDD) алдыңғы беті (IDD) ретроперитонееальды тәсілмен ұшырылды. Әр қоян жалпы анестезия (20% уретан, 5 мл, 5 мл / кг құлақ венасы арқылы) берілді. Теріге арналған бойлық кесу қабырғалардың төменгі жиегінен жамбас жиегінен жасалған, 2 см вентральды вентральды, парофферальды бұлшықеттерге. L1-ден L6-дан кейінгі омыртқаның оң жақ омыртқасы сыртқы тері астындағы тіндердің, ретродитонеальды ұлпаны және бұлшықеттерді өткір және дестендіру арқылы ұшырады (6А-сурет). Диск деңгейі L5-L6 дискісінің деңгейі үшін анатомиялық бағдар ретінде жамбас браузерінің көмегімен анықталды. L5 омыртқасының ұсақ тақтайшасының жанындағы тесіктерді 3 мм тереңдікке бұрғылау үшін 16 габаритті пункцияны қолданыңыз (6b-сурет). L1-L2 омыртқалы-омыртқасындағы Autovourt ядросындағы пульсусқа 5 мл шприцті қолданыңыз (Cурет 6c). Ядро пульсус немесе бұлшықетті әр топтың талаптарына сәйкес алыңыз. Бұрғылау тесті терең түскеннен кейін, фассия, беткей фассия, беткейлік теріге, омыртқаның перивтік тініне операция жасамау керек.
(A) L5-L6 дискісі ретроперитодалдың позиялық тәсілі арқылы жеткізіледі. (B) L5 борышының жанында тесік бұрғылау үшін 16 габаритті қолданыңыз. (С) Autodomout MFS жиналды.
Генерал анестезиясы 20% уретанмен (5 мл / кг) басқарылды, ал құлақ венасы арқылы басқарылды, ал бел омыртқа рентгендері 12, 16 және операциядан кейінгі 20 аптада қайталанды.
Қояндар Кетаминді (25,0 мг / кг) және 12, 16 және 20 аптадан кейін 12, 16 және 20 аптада іштей инъекциялық инъекциялар мен қояндар құрбан болды. Барлық омыртқалар гистологиялық талдау үшін алынып тасталды және нақты талдау жүргізілді. Иммундық факторлардың өзгерістерін анықтау үшін сандық кері транскрипция (RT-QPCR) және батыстық жарқылдар пайдаланылды.
МРТ емтихандары қояндарда 3,0 T клиникалық магнит (GE медициналық жүйелері, Florence, Florence, SC) көмегімен жасалды. Құлақ венасы арқылы қояндар 20% уретанмен (5 мл) эстетадан жасалған, содан кейін магнит ішінде 5 дюймдік диаметрлі диаметрлі дөңгелек катушкалармен (GE медициналық жүйелер) орналасқан. L3-L4-ден L3-L4-ден L3-L4-ден L3-L4-ден L3-L4-ден L4-L6-дан L4-L6-дан алынған корональды T2, 37 MS; TR, TR, 1445 MS; Sagittal Plane T2 өлшемді саңылаулар келесі параметрлермен сатып алынды: $ 2200 MS (TR), 70 мс, матрица (TE) қайталану уақыты (TE)) жылдам айналдырыңыз; 260 және сегіз ынталандырудың визуалды өрісі; Кесу қалыңдығы 2 мм, алшақтық 0,2 мм болды.
Соңғы фотосуреттен кейін соңғы қоян жойылды, ал соңғы қоян өлтірілді, кадр, бұлшықет енгізілген және NP дискілері гистологиялық сараптама үшін алынып тасталды. Тіндер 10% бейтарап буферлік формалинмен, 1 аптаға этилендетацетикалық қышқылмен, ал парафинмен бөлінген. Тіндердің блоктары парафинге еніп, микротомды пайдаланып, сагиттальдық бөлімдерге (5 мкм қалың) кесілген. Секциялар гематоксилинмен және эозинмен (H & E) боялған.
Әр топтағы қояндардан омыртқааралық дискілерді жинағаннан кейін, өндірушінің нұсқауларына сәйкес жалпы РНҚ БАРЛЫҚ-10 бағанын (Shanghai Sangon Biotechon Biotechon Biotechon Biotechon Biotechon Biotechontology Co., Ltd., China) қолдана отырып шығарылды (Promega Inc.) , Мэдисон, Wi, АҚШ). Кері транскрипция жасалды.
RT-QPCR Prism 7300 (қолданбалы BiosSystems Inc., АҚШ) және Sybr Green Jump-ті (SIGMA-Aldrich, Sigma-Aldrich, Sigma-Aldrich, ST. Louis, MO, АҚШ) пайдалану арқылы жүзеге асырды. ПТР реакциясының көлемі 20 мкл болды және 1,5 мкл сұйылтылған CDNA және әр праймерден 0,2 мкм болды. Праймерлерді Олигофектің дизайнері (шақыру, валенсия, Валенсия, CA) және Nanjing Golden Stewart Biotechtology Co., Ltd. (Қытай) шығарған (1-кесте). Келесі жылу велосипедінің шарттары қолданылды: бастапқы полимеразаны іске қосу 94 ° C-қа, 2 минут, содан кейін 94 ° C-қа дейін, әрқайсысы 94 ° C температурада, әрқайсысы 94 ° C, 60 ° C, ұзартқыш, ұзартқыш және флуоресценция үшін 1 минут. Өлшемдер 1 минут 72 ° C температурада орындалды. Барлық үлгілер үш рет күшейе түсті, ал орташа мән RT-QPCR талдау үшін пайдаланылды. Күшейту туралы мәліметтер FliceStation 3 көмегімен талданды (Молекулалық құрылғылар, Sunnyvale, CA, АҚШ). IL-4, IL-17 және IFN-γ гендік өрнек эндогендік басқаруға (актер) қалыпқа келтірілді. Мақсатты өрнек деңгейлері мақсатты мрнаның деңгейі 2-ші әдіспен есептелді.
Тіндерден алынған ақуыз тіндерден алынған, бүрік-лизиз буферіндегі тіндердің гомогенизаторын (протеаза және фосфатаза ингибиторларының коктейлі бар), содан кейін 4 ° C-тан 4 ° C температурада, содан кейін ұлпалық қоқысты кетіру үшін, 4 ° C-тан 20 минут ішінде центрлік центрдендірілген. Ақуыздың елу микрограммасы бір жолға тиелген, 10% SDS-бетте бөлінген, содан кейін PVDF мембранасына жіберілді. Бұғаттау 5% құрғақ сүттен жасалған құрғақ сүттен трис-буферлік тұзды (TBS) бөлмеде 0,1%, бөлме температурасында 1 сағат қосылады. Мембрана қоянға қарсы бастапқы антиденеға инкубацияланды (сұйылтылған 1: 200; BOTER, WUHAN, Қытай) (сұйылтылған 1: 200; биосс, Пекин, Қытай) 13 ° C-тан, екінші күнде жауап берді; Орташа антиденемен (ешкіге қарсы иммуноглобулин G 1: 40,000 сұйылтады), желкек пероксидазасымен (BOTTER, WUHAN, Қытай) бөлме температурасында 1 сағат ішінде біріктірілген. Химилюминесцентті мембрананың рентген сәулеленуінен кейін батыстық блот сигналдары анықталды. Денцитометриялық анализ үшін, үгінділер сканерленіп, сандық бағдарламалық жасақтаманы пайдаланып, нәтижелер Tublin ImpUnoreActivity-ге бағытталған иммунореактивтіліктің арақатынасы ретінде көрсетілді.
Статистикалық есептеулер SPSS16.0 бағдарламалық жасақтама пакетін (SPSS, АҚШ) пайдалану арқылы жүргізілді. Зерттеу барысында жиналған мәліметтер екі топтың арасындағы айырмашылықтарды анықтау үшін ± стандартты ауытқу (орташа ± SD) ретінде көрсетілген және дисперсияның бірнеше рет талдауын қолдану (ANOVA) (Anova) екі топтың арасындағы айырмашылықтарды (Anova) талдауды қолдана отырып, талданды. P <0.05 статистикалық маңызды болып саналды.
Осылайша, омыртқалыққа арналған Autolovour NPS-ді оттегі және макроанатомиялық бақылау, макроганатомиялық бақылау және молекулалық биологиялық талдау жасау арқылы МК жануарлар үлгісін құру, гистологиялық бағалау және моральдық биологиялық талдау жасау араласу.
Осы мақаланы қалай келтіруге болады: Хан, C. және Al. Модельдік өзгерістердің жануарлар моделі Autovourter Iroulter Implant-тің белдік омыртқасының субконральды сүйегіне енген кезде құрылды. Sci. 6, 35102: 10.1038 / SREP35102 (2016).
Вейшауп, Занетти, М., Ходлер, Дж., Ходлер, Дж., Н. бел омыртқасын бейнелеу: Дискінің грыжинасы, жүйке тамырын қысу, үрмелі периодтардың ауытқуы, аяқталудың таралуы, асимптоматикалық еріктілердегі остеоартрит . Тариф. Рентгенологиясы 209, 661-666, DOI: 10.1148 / Радиология.209.3.9844656 (1998).
KJaER, P., Korsholm, L., Bendix, T., Соренсен, Ж.С., К., Лебоуф-Эред, К. Модиктің өзгеруі және олардың клиникалық нәтижелермен байланысы. Еуропалық Омыртқа журналы: еуропалық омыртқа қоғамының, еуропалық омыртқа қоғамының, Еуропалық омыртқа қоғамының және жатыр мойны омыртқаны зерттеулерінің Еуропалық қоғамының және Еуропалық түрде жариялау 15, 1312-1319, DOI: 10.1007 / S00586-006-0185-X (2006).
Куизм, М., Е және басқалар. Белгілердің қосымшасындағы модельдік өзгерістер: орта жастағы ерлердегі арқалық ауырсыну және арқалық ауырсыну және Sciatica байланысы. Омыртқа 32, 1116-1122, DOI: 10.1097 / 01.brs.00261561.12944.ff (2007).
Де Роо, А., Крессель, Х., Сприцер, К., К., Далинка, және Далинка, сүйек кемігінің М. Мид, бел омыртқасының дегенеративті ауруларындағы ұсақ тақтайшаның жанында. AJR. Американдық радиология журналы 149, 531-534, DOI: 10.2214 / AJR.149.3.3.3.3.3.3.3.531 (1987).
Модик, MT, Стейнберг, PM, ROSS, ROSS, JS, JS, MASARYK, TJ, Carter, JR дегенеративті диск ауруы: Миссивті мидың өзгеруін бағалау. Рентгенология 166, 193-199, Doi: 10.1148 / Радиология.166.1.3336678 (1988).
Модик, MT, MS, Masaryk, TJ, ROSS, JS, JS, js, jr, джерсиялық диск ауруын бейнелеу. Рентгенология 168, 177-186, DOI: 10.1148 / Радиология.168.1.3289089 (1988).
Дженсен, TS және al. Неовебральды қоспаның болжамдары (модель) сигналдың жалпы халқының өзгеруі. Еуропалық Омыртқа журналы: Еуропалық омыртқа қоғамының, Еуропалық омыртқа қоғамының, Еуропалық омыртқа да, Еуропалық Оданның омыртқа зерттеу қоғамы, 19, 129-135, DOI: 10.1007 / S00586-009-1184-009-1184-00 (2010).
Альберт, ХБ және Маннисч, К. модельдік модель LINGIUNES. Еуропалық омыртқа журналы: Еуропалық омыртқа қоғамының, Еуропалық омыртқа қоғамының, Еуропалық омыртқа қоғамының және жатыр мойны омыртқаны зерттеулерінің Еуропалық жариялануы 16, 977-982, DOI: 10.1007 / S00586-007-007-007-0333-0333333-0 (2007).
Кертула, Луома, К., Прокм, Т., Т., Гронблад, М., Каапа, М., Каапа, E. Модельді түрдегі E. Өзгертпелі деформациялық дискінің тез ауытқуын болжай алады: 1 жылдық болашақ зерттеу. Еуропалық Омыртқа журналы 21, 1135-1142, DOI: 10.1007 / S00586-012-2147-9 (2012).
HU, ZJ, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ және FAN, SW модельдік өзгерістері: мүмкін себептер мен белдіктің бұзылуына қосқан үлесі. Медициналық гипотезалар 73, 930-932, Doi: 10.1016 / J.MEHY.2009.06.06.06.06.06.06.06.038 (2009).
KROK, HV ішкі диск жыртылуы. Дискіні 50 жылдан асады. Омыртқа (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
POST уақыты: Dec-13-2024